走进西安市疾控中心国家流感网络实验室

检测流感病毒感染活性从鸡胚中收获流感病毒分析核酸检测结果显微镜下观察流感病毒引起的细胞病变鼻咽拭子中提取流感病毒核酸

本报讯今年时值1918年西班牙大流感发生100周年，对于引起超过10亿人的感染、致4000余万人丧命那场“瘟疫”，人们评价其“比第一次世界大战还要可怕、是终结第一次世界大战的上帝之手”。流感，伴随着人类成长不断进化，造成了多次全球大流行，包括1957年的亚洲流感、1968年的香港流感和1977年的俄罗斯流感，最近的一次是2009年起源于墨西哥的那场“猪流感”，让全球再一次感受了流感的影响力，还有近些年来势汹汹的高致病性禽流感H5N1和H7N9。2017年冬，监测显示流感病例比往年大幅增加，医院里人满为患，呼吸科病房一床难求，四下里到处有人在议论着“甲流”，多所幼儿园、中小学因流感疫情纷纷停课，流感、“甲流”到底是什么东西，如此让人们恐慌。其实不必紧张，我们国家有全球最大的流感监测网络，全国400余家流感网络实验室每年在500余家哨点医院进行监测，一旦流感样病例活动增强或病毒流行株发生变化，这个网络能够及时准确地提供流感流行信息，为流感防控提供精准数据。提到流感网络实验室，大家可能觉得神秘，让我们一起走进大雁塔脚下一座11层的大楼，来看看西安市疾病预防控制中心国家级流感网络实验室吧。

一楼大厅宽敞明亮，温暖如春，两盆迎春花开得正艳，榕树盆景郁郁葱葱，东面的墙上“国家流感网络实验室”牌匾分外醒目。据副主任马超锋博士介绍，西安市疾控中心实验室位于中心大楼五至十一层,五、六两层为微生物检验实验室，七、八两层为病毒病检验实验室、九、十两层理化检验室，可以进行食品安全风险监测、环境监测、水质检测、艾滋病筛查与确证、食源性疾患、病毒性疾病的监测检测、雾霾、空气质量监测、职业卫生检测、放射卫生检测。随后，他带我们来到八楼，踏进楼道，一切显得那么神秘。安静、紧闭着的楼道大门两侧张贴着“生物安全”、“工作区域非请勿入”的标志，空气中凝结着一丝严肃，冰冷而静谧。在更衣室，我们全副武装，穿着医用防护服，戴上了口罩和手套，踏进了这个神秘的病毒世界。

这里是陕西省预防医学会病原微生物检验专业委员会、西安市医学优势专科——病原生物学专业的依托单位，这层楼有很多间实验室，每一间都各司其责，有的检测出血热汉坦病毒，有的检测麻疹、风疹病毒，有的检测手足口病肠道病毒，还有的检测分离流感病毒。南侧主要做病毒分离实验，北侧主要做分子生物学实验，拥有实时荧光定量PCR仪、二代基因测序仪、数字PCR仪、全自动核酸提取仪、倒置显微镜、二氧化碳孵箱等仪器设备。甲型H1N1、H3N2、季节性流感的检测结果、各种病毒性疫情的病原检测报告都从这里发出。近年来病毒病检验科处置流感暴发疫情、H7N9、腺病毒、诺如病毒等引起的病毒性疫情以及手足口病重症危重症、手足口病聚集性疫情数百起。无论工作日还是节假日，无论白天还是黑夜，只要有疫情他们总会冲在第一线。就在2017年五月，这里确诊了陕西省首例人感染H7N9流感病例，该病毒虽然不会在人与人之间传播，但是对于很多人而言，这是个陌生又恐惧的东西。而对于这群天天与“病毒”为伍的人们而言早已司空见惯。

病毒病检验科担负着全市流感禽流感、手足口、麻风疹、出血热等病毒的常规监测任务和病毒性疾病突发疫情病原检测工作，其中三人专门负责西安市五家哨点医院的流感检测工作。病毒病检验科科长吴瑞博士给我们介绍了流感网络实验室的工作流程。如果一个患者得了感冒后到医疗机构就诊，医生会根据患者的症状来初步判断是不是属于流感样病例，适合不适合采集标本进行流感病毒检测。这个标本主要是鼻咽拭子，就是医生在患者鼻腔和咽喉部用棉拭子擦拭后放入病毒运送液中，低温专人运送至实验室进行流感病毒检测。这个让流感病毒“现形”的过程由西安市疾控中心和五家医疗机构组成的流感监测网络来完成。一旦遇到本地区出现病毒性疫情等突发事件时，疾控中心实验室工作人员还要在第一时间奔赴现场，采集标本进行病毒病原检测，从而判定引起群体性事件的“罪魁祸首”。医疗机构上报流感样病例主要以症状判断为主，这些数据是流感疫情的预警、预测的重要依据。而患者罹患的是普通感冒还是流行性感冒，是哪种型别的流感病毒，需要通过实验得到答案。

核酸提取室正在开展咽拭子的核酸检测工作。这个实验室监测标本，正是来自西安市五家哨点医院就诊的疑似流感的病患。每家哨点医院，每周都会抽取20位合适的流感样病例，采集鼻咽拭子。鼻咽拭子标本，一个十多厘米长的塑料管中泡着一根几厘米长的棉棒。我们看到检验技师陈海龙和韩月雯两个人身穿实验服，戴着口罩正在一个大柜子里用鼻咽拭子标本提取流感病毒基因，这个大柜子，叫做生物安全柜，流感病毒检测过程中，所有的工作都在生物安全柜中进行，只允许两只手伸进去操作。“这不是普通的柜子，柜里面是负压，也就是说空气只能进去却出不来，生物安全柜既保证了操作环境的安全，对样品和工作人员也是最好的防护。”流感监测实验室属于生物安全防护2级（BSL-2）实验室，也就是通常所说的P2实验室，可以开展流感核酸检测、病毒分离鉴定等工作。他们将试管中浸泡鼻咽拭子的液体加至一个长方形的96孔的板里面，再将这个板放入一台由本地企业西安天隆科技有限公司生产的具有自主知识产权的高科技的核酸提取仪中，利用这台仪器，被流感病毒的外壳包裹的脱氧核糖核酸（RNA）——病毒的遗传信息便“破壳而出”。这些纯化的流感病毒RNA和特异的引物探针和逆转录酶、聚合酶等混合，在核酸扩增仪上利用聚合酶链反应（PCR）进行扩增。在基因扩增室，我们见到在核酸扩增仪上分析流感试验结果的薛泽润医师，他给我们展示了流感病毒RNA检测结果，在计算机显示器上，阳性的结果显示一条漂亮的光滑的S形曲线。

仅完成病毒的核酸检测还不够，为给国家流感中心提供我国流感疫苗构成株所用病毒株，流感网络实验室还要进行流感病毒分离培养工作。病毒培养，就是要人为地提供非常适合流感病毒生长繁殖的“温床”。由于病毒只能在特定种类的活体细胞中生长繁殖，因此流感病毒需要在犬肾上皮细胞（MDCK）或鸡胚中分离培养。将流感病毒核酸阳性的咽拭子标本加入到准备好的的MDCK细胞上，流感病毒就会侵入这些细胞，并在这些活细胞中增殖。副主任检验技师黄银娟一边在显微镜下观察细胞的生长情况，一边告诉我们“那些感染病毒的细胞可能会发生肿胀、皱缩等病理变化，称之为细胞病变，在显微镜下观察到细胞产生病变即可收获大量的流感病毒”。在另一间病毒分离室，我们见到了正在从鸡胚中收获流感病毒的吴瑞博士和李焱技师的工作场景。她俩告诉我们，鸡胚分离获得的毒株可以用来制作疫苗，分离过程是将咽拭子标本接种到9-11日龄的鸡胚内，病毒便可以在鸡胚内增长繁殖，收获尿囊腔的液体即可收获大量的活病毒。收获的毒株是否有感染性，其感染能力有多强，在病毒鉴定实验室，我们见到了正在利用血凝实验分析病毒分离株感染性的杜全丽主管技师，她告诉我们这些毒株是进行流感病毒进一步研究的基础，是研究病毒各种特性的重要材料，可以进行基因变化的分析、进行抗原性变化的检测，可以为次年的流感疫苗病毒毒株选择提供重要的实验室依据。

马超锋博士介绍，每年冬春季是我国北方流感的高发季，这个时期当有人得了流感，空气中充斥着流感病毒，由于通风换气不够，使得病毒浓度无法稀释，人口密集的场所尤其是学校就容易出现流感的流行，因此经常能够接到一个学校同一个班级多人先后感染流感病毒的报告，每当这个时候，校医就会及时报告给所属辖区的疾控中心。有时医疗机构也会发现一定数量的来自同一学校的、具有相似症状的患者前来就诊，也会及时报告给所属辖区的疾控部门。疾控部门会第一时间赶到现场，进行流行病学调查，标本采集和实验室检测。流感疫苗是预防流感的有效手段，我国北方的老人、小孩、孕妇和有基础疾病的高危人群可在每年10月底接种流感疫苗，这样就可在流感高发季节获得有效免疫力。目前已经研发出了治疗流感病毒的特效药，在感染早期可以使用，能够大大缩短病程、减轻症状，但这种药物只对流感病毒有效，对于非流感的普通感冒的病原无能为力。

采访结束，再次回首，安静而整洁的楼道，时而闪过一个忙碌的身影，突然间感觉这里不是冰冷静谧，而是充满了激情，这样一个团队，这样一群疾控人，这个冬季，流感肆虐，有了他们的守护，我们能感受到如春温暖！

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