微生物检验的常用染色法

□ 乐山老年病专科医院 卢凤

染色是微生物检验中基本技术也是关键技术，一般情况下，因为菌体过小，并且多是透明或者半透明状，如果不经染色，很难细致清楚识别，借助染色法使细菌着色，形成与视野背景中的明显差别，才能更易于观察分析。微生物检验中常用的染色方法很多，本文主要结合革兰染色法、抗酸染色法、墨汁染色法以及棉兰染色法进行简单介绍。

1.革兰染色法革兰染色法在细菌检验中应用十分广泛，可将细菌明确分为阴性、阳性两类，以助于对细菌进行初步识别，缩小范围，结合阴性与阳性细菌之间细胞壁结构明显差异表现，也对抗菌药物的选择有所参考。

染色中要先将细菌过碱性染料结晶紫染色，再以碘液加以媒染，随后使用酒精进行脱色，结合脱色反应可以将细菌分为阳性和阴性，阳性细颜色可以脱去，而阴性菌不可以；同时还可结合碱性蕃红加以复染操作，阳性菌可保持紫色，而阴性菌会被染为红色，细菌与观察背景之间出现明显差异，便于观察。

革兰染色法最终的结果会受操作者的技术影响，特别是在脱色环节中，如不控制好时间，10～20s，很容易过度脱色，使阳性菌染成阴性表现，此外还要注意涂片不要太厚，将涂片与脱色两者控制好，一般操作性问题不会多发。

2.抗酸染色法抗酸染色法主要应用在结核病以及麻风病等细菌检查及初步进行诊断的环节，其染色原理与分枝杆菌之类抗酸性菌自身特性有关，因为该类菌体表面都会覆盖一层类脂或脂质膜，该膜很难着色，但一旦着色之后，即便使用酸性酒精溶液也难以轻易使之褪色，抗酸染色法就是以该特性入手，使用强化染色液使细菌着色，并使用酸性酒精溶液处理，等非抗酸性菌脱色后再进行对比染色，在抗酸性菌仍保持初始颜色的情况下，更容易鉴别。常用的有碱性复红法和荧光染料法两种。

抗酸性染色法检验中需要格外注意时间控制：加热时间不宜超过5s，来回过火焰4～5次即可，此外，还需禁止同张玻片上涂放两份及以上标本，以免影响染色效果。

3.墨汁染色法墨汁染色法主要用于对菌体上荚膜结构存在与否的观察判断，可以对新生隐球菌加以鉴定。具体操作中先以墨汁染色液滴加在涂片上，覆盖后玻片后静置十分钟之后即可观察，因为视野背景是黑色，与白色透明晕圈形成明显对比，所以在低倍镜下如果看到白色光点，中间伴随一处细胞状圆形物，即可使用高倍镜加以确认，很可能就是新型隐球菌的表现。

墨汁染色法中需要注意控制墨汁染色液的质量，不要用已经过期的墨汁，并且其应是未经污染、没有变质情况下；对于检查发现的新生隐球菌可接种到脑心浸液中，装配好后需要控制温度在4℃左右。

4.棉兰染色法棉兰染色法主要用来对真菌的菌丝以及孢子形态进行鉴别。其主要针对于真菌菌丝粗大、细胞易变形以及孢子易分散的特性，借助棉酚蓝染液使其结构均呈现出亮蓝色，以更便于观察。该染色法操作过程较为简单，需滴加乳酸酚棉兰染色液在玻片上，并以接种针铺摊标本，加盖加温后即可镜检。

在质量控制中，一方面应注意背景色的控制，因为染色后的孢子与菌丝都呈蓝色，所以背景色以淡色为宜；另一方面注意待检真菌质量控制，如果阳性菌培养时间过长、死亡或细菌溶解，都会在检验中出现阴性结果。

以上几种微生物检验中的染色方法算是比较常见的部分，在临床检验治疗工作中发挥着积极作用；具体操作中要注意待检标本以及具体检验操作方法的质量控制，保证检验结果更加真实有效。

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